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实验室小鼠基因型鉴定方法

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发表于 2022-9-20 11:09:34 | 显示全部楼层 |阅读模式
适用于鉴定各种实验动物,本文以小鼠为例
一、取组织

  • 用打孔器穿孔取小鼠耳片,或用剪刀剪去尾巴末端白色小段,放入离心管
二、裂解

  • 向离心管中加入0.05mol/L的NaOH,放入金属浴锅内裂解20min左右,至耳片变透明即可
  • 加入0.1mol/L的Tris-Hcl,涡匀,12000rpm离心5min,得模板DNA
三、PCR

  • 按PCR试剂盒加入对应体积的酶、dNTP、引物、模板DNA
  • 根据引物设置退火温度,设置循环次数,跑PCR
四、跑胶验证

  • 制胶。根据目的DNA片段的大小配制胶浓度,常用1-3%的胶。步骤:称取琼脂糖凝胶加入相应体积的TBE,微波炉加热溶解,至恰好完全溶解,液面冒大的气泡即可,稍微冷却,以EB:凝胶=1:20000的比例加入EB,同方向轻摇使其完全混匀,待温度冷却是60左右,倒入插有梳子的胶板中,冷却凝固30min后,垂直向上拔出梳子,胶块放入电泳槽
  • 加样,加maker,电泳30min左右
  • 在凝胶成像系统观察、成像
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发表于 2022-9-20 11:29:14 | 显示全部楼层
支持,楼下的跟上哈~
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发表于 2022-9-20 18:07:48 | 显示全部楼层
鼎力支持!!
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发表于 2022-9-21 02:48:21 | 显示全部楼层
大人,此事必有蹊跷!
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发表于 2022-9-21 04:10:41 | 显示全部楼层
佩服佩服!
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发表于 2022-9-21 06:07:42 | 显示全部楼层
珍爱生命,果断回帖。
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发表于 2022-9-21 15:31:04 | 显示全部楼层
看起来好像不错的样子
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发表于 2022-9-22 12:35:20 | 显示全部楼层
发发呆,回回帖,工作结束~
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发表于 2022-9-22 14:17:10 | 显示全部楼层
占位编辑
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发表于 2022-10-20 09:22:13 | 显示全部楼层
秀起来~
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