动物实验之实验动物血液采集方法

牛小刀

动物实验
                                                       实验动物血液
                                                         采集方法

                                                                                                                         启领实验室
在各种实验研究中，常常需要采集实验动物的血液，以供进行常规检验或生化及化学分析之用，故必须掌握正确的采血技术。


                                                 实验动物血液采集方法
实验动物的采血方法很多，按采血部位不同，可分为：尾部采血(割、剪鼠尾)，鼠尾刺血法，眼眶静脉丛采血，断头采血，心脏采血，颈静脉(动脉)采血，腹主动脉采血，股动(静)脉采血，耳缘剪口采血，耳静脉采血，后肢外侧小隐静脉采血，前肢内侧皮下头静脉采血，毛细血管采血，翼下采血等。
采血时要注意采血场所有充足的光线：室温夏季最好保持在25～28℃，冬季20～25℃为宜，采血用具和采血部位一般需进行消毒；若需抗凝血，应在注射器或试管内预先加入抗凝剂；所需采血量应控制在动物的最大安全采血量范围内。由于采血量的不同，因而采血的部位也不同。


实验动物采血时应注意不宜一次采血量过多或采血过于频繁，否则因采血可影响动物健康，造成贫血，甚至死亡。动物多次重复采血时，采血时间应相对固定。
在采血时应注意：有些项目检查需要空腹或禁食一定时间后采血，如肝功能、血糖、血脂等。另也应注意多次采血测结果时采血后测定时间、室温、试剂盒批号(或用主要试剂)等应尽可能一致。


                                                    大鼠和小鼠采血方法
1、割尾采血：
需血量较少时采用此法采血。先将动物固定或麻醉，并露出鼠尾，将鼠尾浸在45℃左右温水中数分钟或将鼠尾放在电取暖前烤数分钟或用酒精涂擦鼠尾，使鼠尾血管充盈，然后将鼠尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖1～2mm(小鼠)或3～5mm(大鼠)，让血液自由顺管壁流入试管或用血红蛋白吸管吸取，为采取较多的血，用手自尾根部向尾尖按摩。采血结束时，伤口消毒，并压迫止血，也可用火烧灼(电器烧灼)止血或6％火棉胶涂敷止血。也可在尾部做一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液及止血方法同上。此法采血每鼠一般可采血10余次，小鼠每次可采血0.1ml左右，大鼠可采血0.3～0.5ml，如方法合适，室温较高，小鼠也可采血0.5ml以上，大鼠可采血3ml以上。
2、鼠尾刺血法
大鼠采血量很少时(用于做白细胞计数、血红蛋白检查或血糖测试)，可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血，用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，如长期反复采血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后逐渐向近心端穿刺。
3、眼眶后静脉丛采血
左手抓住鼠两耳之间的头部皮肤，使头部固定，并轻轻向下压迫颈部两侧，引起头部静脉血液回流困难，使眼球充分外突，眶后静脉丛充血。右手持长为7～10cm的玻璃制采血管(毛细管内径1～1.5mm、毛细管段长约1cm，另端渐扩大成喇叭形)或连接7号针头的1ml注射器，使采血器与鼠面成45℃的夹角，将针头刺入下眼睑与眼球之间，轻轻向眼底部方向移动，在此处旋转采血管以切开静脉丛。把采血管保持水平位，稍加吸引，即可取出血液。当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。一般刺入深度小鼠约2～3mm，大鼠约4～5mm，刺入时，当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1～0.5mm，可边退边抽采血液。
小鼠、大鼠、豚鼠、家兔皆可自眼眶后静脉丛采血，根据实验需要，可在数分钟后在同一穿刺孔重复采血，一般两眼轮换采血，小鼠每次可采血0.2～0.3ml，大鼠每次可采血0.5～1.0ml。
4、心脏采血
鼠类心脏较小，且心率较快，心脏采血较困难，一般较少用，小鼠几乎不用活体心脏采血。大鼠采血时将大鼠仰卧固定于固定板上，将心前区部位毛剪去，并用碘酒酒精消毒此处皮肤，在左侧第3～4肋间，用左手食指触摸心搏动处，右手取连接有4～5号针头的注射器，选择心搏最强处穿刺，当针刺入心脏时，血液由心脏跳动的力量自动进入注射器，也可由左手抓住大鼠，右手选择心搏最强处后直接将针刺入心腔，心脏采血时最好一次刺中心脏，反复刺心脏，会引起动物死亡。
也可开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸采血液。
5、眶动脉或眶静脉采血
先将动物用左手倒持固定，压迫颈(背)部，使眼球突出并充血，以弯头小止血钳(或镊子)迅速钳取眼球(或挖取眼球)，并用镊子头部捅破眼球后包膜，眼眶内很快流出或喷出血液，将血滴入预先加有抗凝剂的器皿内，直至达到要求的采血量，一般可取动物体重的4％～5％血液量。如采血时眼部血液凝固，可再挖取对侧眼球，并做规律性松紧挤压胸腔，以促使血液流出。此种采血方法为一次性采血，采血后动物多死亡。
6、颈静脉或颈动脉采血
将动物麻醉后背部固定，剪去一侧颈部外侧毛，解剖颈部，并分离暴露颈静脉或颈动脉，用注射针沿颈静脉或颈动脉平行方向刺入，抽取所需血量，此种方法小鼠可采血0.6ml左右，大鼠可取8ml左右。也可把颈静脉或颈动脉剪断，以注射器(不带针头)吸取流出来的血液，或用试管采血。
7、股静脉或股动脉采血
动物麻醉后背位固定，切开左或右腹股沟的皮肤，分离股静脉或股动脉，将注射针平行于血管刺入静脉或动脉内，徐徐抽动针栓，即可采血。也可不麻酸及不手术动物，先由助手握住动物，采血者左手拉直动物下肢，使静脉充盈，或者以搏动为指标，右手用注射器刺入血管采血。一般小鼠可采血约0.2～0.8ml，大鼠可采血约0.4～1.6ml。如连续多次股静脉采血时，则采血部位要选择尽量靠离心端。
8、腹主动脉采血
动物麻醉后仰卧位固定，从腹正中线皮肤切开腹腔，使腹主动脉暴露，用注射器抽采血液：也可用结扎腹主动脉远心端，用阻断器阻断腹主动脉近心端，然后在其间平行刺入，并松开近心端的阻断，立即采血。
9、断头采血
左手拇指和食指从背部较紧地握住鼠颈部皮肤，并将动物头部朝下，右手用剪刀猛剪鼠颈，剪断约1/2～4/5的颈部，让血液流入容器，小鼠可采血0.8～1.2ml，大鼠5～10ml。采血时应注意防止动物毛等杂物流入容器引起溶血。


                                                             豚鼠采血方法
1、耳缘剪口采血
将耳消毒后，用锐器(刀或刀片)割破耳缘血管，血液会从血管中流出，此法能采血0.5ml，采血后用消毒纱布压迫止血5～10秒。
2、心脏采血
将豚鼠仰卧固定于固定板上，将心前区部位毛剪去，并用碘酒酒精消毒此处皮肤，在左侧第4～6肋间，用左手食指触摸心搏动处，右手取连接有4～5号针头的注射器，选择心搏最强处穿刺，当针刺入心脏时，血液由心脏跳动的力量自动进入注射器。
3、背中足静脉采血
助手固定动物，将其右或左后膝关节伸直提到术者面前。术者将动物脚背用酒精消毒，找出背中足静脉后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿注射针刺入静脉。拔针后立即出血，用吸管吸血供实验用。采血后，用纱布或脱脂棉压迫止血。反复采血时，两后肢宜交替使用。
此外，豚鼠还可采用股动脉采血，眼眶静脉丛采血，颈静脉采血等，方法参照大小鼠采血法。


                                                            家兔采血方法  
1、心脏采血
家兔仰卧固定，用左手触摸心脏搏动处，选择心跳动最明显处做穿刺。穿刺部位是第3肋间隙，胸骨右缘3mm处，每次采血不超过20～25ml，应用此法可进行心腔内注射和采血，一般经6～7天后，可以重复进行心脏穿刺术。
2、耳缘静脉采血
将动物固定后，露出两耳，选静脉清晰的耳朵去毛，常规消毒，压迫耳根部，使静脉充盈，即可用针头穿刺静脉采血。一次采血可5ml左右。
如取少量血液做一般常规检查时，可待耳缘静脉充血后，在靠近耳尖部血管，用5 1/2号针头刺破血管，即从刺破口流出血液。

3、兔耳中央动脉采血
将兔置于兔固定盒内，在兔耳的中央有一条较粗，颜色较鲜红的中央动脉，用左手固定兔耳，右手取注射器，在中央动脉的末端，沿着动脉平行地向心方向刺入动脉，即可见动脉血进入针筒，采血后用药棉压迫止血。此法一次抽血可达15ml。采血用的针头一般用6号针头，不宜太细，针刺部位应从中央动脉末端开始，不要在近耳根部采血，因耳根部软组织厚，血管位置略深，易刺透血管导致皮下出血。兔耳中央动脉易发生痉挛性收缩，因此抽血前，必须让兔耳充分充血，当动脉扩张，未发生痉挛收缩前，立即进行抽血。
4、后肢胫部皮下静脉采血
将兔仰卧固定后(或由一人将兔固定好)，拔去胫部被毛，在胫部上端股部扎以橡皮管后，在胫部外侧浅表皮下可清楚见到皮下静脉。用左手两指固定好静脉，右手取带有5 1/2号针头的注射器由皮下静脉平行方向刺入血管，抽动针栓如血进入注射器，即可采血。一次可取2～5ml。采血后用棉球压迫采血部位止血，时间一般需1分钟。如止血不妥，可造成皮下血肿，影响连续多次采血。
5、股静脉采血
动物麻醉仰卧固定后作股静脉暴露分离手术股静脉采血时，注射器平行于血管，从股静脉下端向心方向刺入，抽动针栓即可采血。采血量较多，一般一次可取10ml以上。采血完毕后，用干纱布或棉球轻轻压迫采血部位以止血。
6、颈静脉采血
动物麻醉仰卧固定后作颈静脉暴露分离手术，注射器由近心端(距静脉分支2～3cm处)向头侧端顺血管平行方向刺入，使注射针一直引申到主颈静脉分支分叉处，即可采血，此处血管较粗，采血量较多，一般一次可取10ml以上。采血完毕后，应用干纱布轻轻压迫采血部位以止血。


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